Un paso más hacia el diagnóstico rápido de la tuberculosis

Un grupo de científicos de diferentes instituciones en Suiza, Alemania, Sudáfrica, Perú, India,Azerbaiyán, y Estados Unidos, acaba de publicar en The New England Journal of Medicine la comprobación de la eficacia de un nuevo método automático para detectar en no más de dos horas si una persona está infectada por el bacilo de Koch, Mycobacterium tuberculosis(MTB), causante de la tuberculosis. El método permite además detectar si la cepa que infecta al paciente es resistente a rifampicina (RIF), uno de los antibióticos de primera línea usados contra la tuberculosis.

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El “Xpert MTB/RIF” es como se ha llamado la máquina que permite en no mas de dos horas diagnosticar la tuberculosis. Para iniciar el procedimiento se obtiene una muestra de esputo del paciente y se inactiva con un reactivo especialmente formulado para matar la bacteria, licuarla y estabilizar los componentes. La manipulación de la muestra es mínima, basta con agitar la mezcla, dejarla reposar un cuarto de hora y volver a agitarla. De esa mezcla, ya inocua, se retira un pequeño volumen, de 2 a 3 mililitros, o sea lo que sería una cucharada sopera, y se introducen en un cartucho en el que se encuentran todos los reactivos necesarios para realizar el análisis. A partir de ahí ya todo lo hace la máquina, que tras una hora y tres cuartos facilita el resultado, tanto en una pantalla como en una impresora.

M. tuberculosis, la bacteria causante de la tuberculosis, mata aproximadamente a dos millones de personas al año. El control global de la misma se hace cada vez más difícil por la aparición de cepas multiresistentes a los antibióticos y porque las personas infectadas por VIH (el virus del SIDA) son especialmente propensas a desarrollar la enfermedad. Pero también porque eldiagnóstico de la infección es muy laborioso y técnicamente complejo. La necesidad de encontrar un nuevo método de diagnóstico que permita una detección temprana de la enfermedad, es por ello esencial para reducir la tasa de muertes e interrumpir su transmisión.

El “Xpert MTB/RIF” ha sido probado en 1730 pacientes entre India, Sudáfrica, Azerbaiyán y Perú, países en los que se concentra la mayor tasa de prevalencia de tuberculosis. Las muestras que se eligieron para comprobar el “Xpert MTB/RIF” fueron elegidas entre pacientes con sospecha de padecer tuberculosis multiresistente. En los pacientes de Sudáfrica un 70% de casos van acompañados por la infección con VIH; en la India el 50% de los casos son multiresistentes a los antibióticos. El test ha presentado una sensibilidad y especificidad en la detección de la tuberculosis y resistencia a rifampicina del 98% y ofrece los resultados en unas 2 horas y con un tiempo de manipulación de muestra por parte del personal sanitario de menos de 15 minutos.

Tradicionalmente la tuberculosis se diagnostica por crecimiento selectivo del bacilo del esputo en un medio de cultivo, el llamado medio Lowenstein-Jensen y detección al microscopio tras un proceso de tinción específico, la tinción de Ziehl-Neelsen. El bacilo permanece así activo durante el suficiente tiempo como para necesitar que el diagnóstico precise de instalaciones adecuadas para impedir la infección del personal técnico sanitario.

Por el contrario, en el “Xpert MTB/RIF”, el único paso que se realiza de forma manual, es la adición del reactivo bactericida a la muestra (esputo) justo antes de introducirlo en la máquina. La utilización del diagnóstico por el “Xpert MTB/RIF” elimina así el inconveniente de necesitar laboratorios de alta bioseguridad ya que todas las reacciones se realizan después de inactivar los gérmenes presentes en el esputo. El test automático MTB/RIF integra una modificación de la reacción convencional de polimerasa en cadena, PCR, con la que se reduce la contaminación del producto amplificado, en este caso el gen llamado rpoB ; mutaciones en este gen, que codifica para la subunidad beta de la ARN polimerasa, están implicadas en la resistencia a rifampicina. Contiene además todos los reactivos necesarios para la lisis bacteriana, extracción del ADN y detección del producto amplificado.

En el “Xpert MTB/RIF” los pasos finales del ensayo, los que dependen de la reacción en cadena de la polimerasa, un procedimiento muy sensible pero que es muy propenso a las contaminaciones de la muestra, tienen lugar en un recipiente herméticamente sellado, lo que elimina la posibilidad de contaminación, y por ello de falsos positivos. Otra ventaja del “Xpert MTB/RIF” es que para su manipulación no se necesita personal tan especializado. Esto supone una gran ventaja para realizar el diagnóstico en las áreas rurales mal comunicadas y con pocos recursos de los países con mayor índice de esta enfermedad, puesto que el entrenamiento que se necesita para llevar a cabo el test es mínimo. Por otra parte, el tiempo que tarda la máquina en dar el resultado del análisis es de menos de 2 horas, esto es otra ventaja en comparación con la técnica utilizada hoy en día, el crecimiento de la muestra en medio selectivo y la tinción de Ziehl-Neelsen que, además del peligro que acarrea su manipulación, tarda como mínimo unas 2 semanas en obtener resultados.

El coste elevado de la máquina que realiza el diagnóstico y el de los cartuchos de un solo uso, así como que se necesita calibrarla cada año, son todavía los mayores escollos que aparecen para que su uso se extienda en las regiones más desfavorecidas, precisamente en las que mayores problemas causa la tuberculosis. Aún así, sería posiblemente más barato tener esta máquina automática en centros sanitarios estratégicamente seleccionados y establecer sistemas eficaces para el transporte de las muestras inactivadas que disponer del personal entrenado y de las instalaciones materiales y reactivos que se necesitan hoy en día para cultivar las muestras de los pacientes y comprobar si los bacilos que pueden encontrarse son sensibles a los antibióticos. De esta manera podemos pensar que ya se acerca el momento en el que la lentitud en el diagnóstico deje de ser uno de los principales agravantes de la tuberculosis. Posiblemente desterrar la pobreza, la principal causa que contribuye a esta lacra, lleve más tiempo.

REFERENCIA:

Boehme CC, Nabeta P, Hillemann D, Nicol MP, Shenai S, Krapp F, Allen J, Tahirli R, Blakemore R, Rustomjee R, Milovic A, Jones M, O’Brien SM, Persing DH, Ruesch-Gerdes S, Gotuzzo E, Rodrigues C, Alland D, Perkins MD. 2010. Rapid molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance. N Engl J Med. 363:1005-1015.

* Cristina Ortiz es Licenciada en Químicas por la Universidad Autónoma de Madrid y realiza su tesis doctoral en el Departamento de Biotecnología Microbiana del Centro Nacional de Biotecnología.


Fuente:http://www.madrimasd.org/blogs/microbiologia/2010/09/26/130999

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