Comparan análisis de PCR en tiempo real para la cuantificación viral

Se ha comparado el desempeño de tres análisis de reacción en cadena de la polimerasa para la cuantificación del poliomavirus BK.

La reactivación del poliomavirus BK latente, se asocia con la nefropatía (PVAN) después del trasplante renal y las determinaciones de carga viral BK son un método altamente específico y sensible para predecir el riesgo de PVAN.


Imagen: El virus BK en las células de epitelio renal (Fotografía cortesía del Colegio Americano de Patología).

En el Hospital del Centro Médico de Albany (Nueva York, EUA) un equipo de investigadores recogió 100 muestras de plasma anticoagulado de 69 pacientes con trasplante renal que fueron analizadas con tres ensayos de PCR en tiempo real (rt-PCR) para la determinación de la carga viral del BK. Los ensayos de rt-PCR fueron evaluados en términos de linealidad, rango dinámico, y exactitud, comparándolos con una PCR convencional con los cebadores y la sonda usando como objetivo el antígeno T grande (TOR) (Integrated DNA Technologies, Coralville, IA, EUA).

Los dos análisis comerciales de rt-PCR utilizados fueron los Reactivos Analito-Específico de virus MultiCode-RTx BK (MC-RTx) (ASR) de Luminex (Austin, TX, EUA) y el MGB-Alert BKV ASR (MGB) de Epoch Biosciences (Princeton, NJ, EUA). Un análisis desarrollado en el laboratorio (LDA) también fue evaluado. De las 100 muestras de 69 pacientes, enviadas al laboratorio, para las mediciones de rutina de poliomavirus por el TOR y analizadas con los tres ensayos de rT-PCR, 76 fueron definidas como verdaderos positivos para BKV ADN y ninguna muestra era inhibitoria para la PCR.

El ensayo MC-TxR fue positivo para todas las 76 muestras, mientras que el MGB fue positivo para 64 y el LDA fue positivo para 55. El rango de carga viral para estas muestras iba desde 1.71 hasta 7,55 log10 copias/mL, mientras que la carga viral media fue de 3,01 log10 copias/mL. El ADN del BKV no fue detectado por ninguno de los métodos en las muestras negativas verdaderas. La sensibilidad de los ensayos fue de 100% para el MC-RTX, 84% para el MGB y 72% para el LDA y las especificidades fueron del 100% para los tres ensayos.

Los autores concluyeron que los tres análisis de PCR, en tiempo real, son fiables para la medición de las cargas de BKV para la identificación de pacientes en riesgo de PVAN. Estos ensayos demostraron superioridad sobre los TOR con respecto a la precisión. MC-RTX parece tener una mayor sensibilidad y un mejor rendimiento entre las cepas divergentes de BK.

Fuente :Labmedica

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