Novedosa prueba para diagnóstico de la malaria

Un novedoso análisis de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), con una sola amplificación, ha sido utilizado para el diagnóstico de la malaria en los viajeros que regresan de zonas endémicas.

Se ha diseñado un práctico análisis de PCR, específico para el género Plasmodium, con una sola ronda de amplificación y que se basa en los cebadores dirigidos al locus 18S y al genoma mitocondrial, con sensibilidad y especificidad igual a la de la PCR anidada.

Especialistas en enfermedades tropicales del Hospital Universitario Haukeland (Bergen, Noruega) llevaron a cabo un estudio retrospectivo de muestras de sangre total, de una cohorte de 132 pacientes con fiebre y con posibilidades de haber importado malaria primaria o recurrente entre los años 2006 a 2011. Las muestras habían sido analizadas previamente en búsqueda de parásitos de la malaria en láminas con frotis sanguíneo y gota gruesa, teñidas con Giemsa, por microscopistas experimentados. Tres análisis de PCR, dos específicos para el género y uno específico para la especie, fueron evaluados en la cohorte de muestras de pacientes. Los productos de la PCR mitocondrial fueron secuenciados en ambas direcciones.

Entre las 135 muestras analizadas, 28 fueron definidas como positivas para malaria al menos por dos de los métodos entre los de microscopía y los tres diferentes análisis de PCR específicos por género. La nueva PCR mitocondrial fue 100% sensible, al detectar los 28 positivos. Con el umbral de dilución de 0,5 parásitos/µL, la sensibilidad de la PCR mitocondrial fue de 97%, la de la PCR 18S con una sola amplificación, fue de 93% y la de la PCR 18S anidada de referencia fue de 87%. Los dos análisis de una sola ronda de amplificación identificaron todos los positivos para malaria diagnosticados por la PCR anidada que tuvo una sensibilidad de 96%.

La secuenciación de los productos de la PCR mitocondrial específica por género reveló diferentes polimorfismos de nucleótido único, lo cual permitió la identificación de las especies de las 28 secuencias con la siguiente distribución: 20 fueron Plasmodium falciparum, 6 fueron P. vivax, 1 fue P. ovale y 1 fue P. malariae. Los microscopistas habían dejado pasar dos parasitosis que fueron detectadas por todos los análisis de PCR.

Los autores concluyeron que el diseño de programas de PCR con los parámetros adecuados y de forma optimizada condujo a tener análisis de amplificación de una sola ronda más sencillos y rápidos. Tanto la sensibilidad como la especificidad de la nueva PCR mitocondrial fueron de 100% y demostraron ser equivalentes a las de la PCR anidada de referencia. La secuenciación de los productos de la PCR mitocondrial específica por género se podría utilizar para la determinación de las especies.

Fuente: Labmedica

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